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冷凍保種實(shí)驗(yàn)服務(wù)
更新時(shí)間：2025-06-26
訪問量：28
廠商性質(zhì)：其他
1. 冷凍保種實(shí)驗(yàn)服務(wù)內(nèi)容概述
A. 適用樣本類型
微生物：細(xì)菌（如大腸桿菌、乳酸菌）、酵母（如畢赤酵母）、絲狀真菌、噬菌體等。
細(xì)胞系：哺乳動(dòng)物細(xì)胞（如HEK293、HeLa）、干細(xì)胞、原代細(xì)胞等。
特殊樣本：難培養(yǎng)微生物（如厭氧菌）、基因編輯菌株（如CRISPR改造菌）。
B. 服務(wù)項(xiàng)目
| 項(xiàng)目 | 描述 |
|---|---|
| 標(biāo)準(zhǔn)凍存 | 使用甘油或DMSO凍存液，-80℃或液氮保存。 |
| 優(yōu)化凍存方案 | 針對(duì)脆弱菌種（如支原體）定制凍存保護(hù)劑。 |
| 復(fù)蘇驗(yàn)證 | 凍存后復(fù)蘇，檢測(cè)存活率、污染及功能（如質(zhì)粒保留、基因表達(dá)）。 |
| 庫(kù)存管理 | 提供條形碼標(biāo)簽、電子數(shù)據(jù)庫(kù)記錄（凍存時(shí)間、位置、基因型等）。 |
| 快遞運(yùn)輸 | 干冰或液氮罐運(yùn)輸凍存管，確保全程低溫。 |
2. 冷凍保種實(shí)驗(yàn)服務(wù)技術(shù)流程
A. 標(biāo)準(zhǔn)凍存步驟（以大腸桿菌為例）
前處理：
培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（OD600≈0.6-0.8）。
離心收集菌體，去除殘留培養(yǎng)基（避免冷凍損傷）。
凍存液制備：
常用保護(hù)劑：15-30%甘油（細(xì)菌）或10% DMSO（哺乳細(xì)胞）+培養(yǎng)基。
特殊配方：如海藻糖（提高真菌存活率）。
分裝與標(biāo)記：
分裝至凍存管（推薦1.5 mL螺口凍存管），標(biāo)注菌株名稱、日期、濃度。
冷凍程序：
梯度降溫：4℃ 30 min → -20℃ 1 h → -80℃長(zhǎng)期保存（或直接液氮?dú)庀啵?/p>
程序冷凍儀：精確控制降溫速率（如1℃/min，適用于敏感細(xì)胞）。
液氮保存：
轉(zhuǎn)移至液氮罐（氣相：-150℃至-196℃），避免液相中管爆裂。
B. 復(fù)蘇驗(yàn)證
快速解凍（37℃水浴，<1 min）。
涂板或液體培養(yǎng)，檢測(cè)：
存活率（CFU計(jì)數(shù) vs 凍前）。
遺傳穩(wěn)定性（PCR驗(yàn)證目標(biāo)基因、質(zhì)粒保留率）。
污染檢測(cè)（無抗生素平板培養(yǎng)、16S rRNA測(cè)序）。
3. 關(guān)鍵注意事項(xiàng)
A. 提高存活率的策略
保護(hù)劑優(yōu)化：
細(xì)菌：甘油濃度需匹配菌種（如乳酸菌需20%甘油+5%脫脂奶粉）。
細(xì)胞：血清替代物（如HyClone FBS）減少批次差異。
冷凍速率：
快速冷凍（直接-80℃）適合多數(shù)細(xì)菌，慢速冷凍（程序降溫）適合真核細(xì)胞。
B. 避免常見問題
| 問題 | 原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
| 復(fù)蘇后無生長(zhǎng) | 保護(hù)劑濃度不當(dāng)或凍存液未混勻 | 重新優(yōu)化保護(hù)劑，渦旋混勻后再凍存。 |
| 細(xì)胞破裂 | 冰晶形成（降溫過慢） | 添加冷凍保護(hù)劑（如DMSO），程序降溫。 |
| 污染（真菌/支原體） | 凍存前樣本不純或操作污染 | 凍存前抗生素處理、PCR檢測(cè)。 |
4. 用戶常見問題（FAQ）
Q1：凍存菌種能保存多久？
-80℃：細(xì)菌通常2-5年，酵母1-3年（定期復(fù)蘇驗(yàn)證）。
液氮：>10年（需避免溫度波動(dòng)）。
Q2：如何運(yùn)輸凍存菌種？
干冰運(yùn)輸：維持-78℃，適合短期（<3天）。
液氮罐：長(zhǎng)期運(yùn)輸需專業(yè)容器（如Taylor-Wharton液氮罐）。
Q3：凍存后基因會(huì)突變嗎？
風(fēng)險(xiǎn)較低，但建議：
保存早期傳代菌株（避免累積突變）。
關(guān)鍵菌株備份多管（避免反復(fù)凍融）。
6. 延伸服務(wù)
菌種鑒定：16S rRNA測(cè)序、MALDI-TOF質(zhì)譜分析。
專l保藏：協(xié)助提交至中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC）或ATCC。
