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尿路感染模型構(gòu)建
更新時(shí)間：2025-06-23
訪(fǎng)問(wèn)量：19
廠商性質(zhì)：其他
一、尿路感染模型構(gòu)建流程（雌鼠膀胱感染模型）
1. 關(guān)鍵準(zhǔn)備
特殊器材：24G靜脈留置針（剪去針頭保留軟管段）
菌株處理：UPEC菌株（如UTI89）在LB中培養(yǎng)至OD600=0.3（對(duì)數(shù)早期，粘附力更強(qiáng)）
小鼠預(yù)處理：
禁水4小時(shí)后腹腔注射速尿（10mg/kg）促進(jìn)膀胱排空
麻醉后使用溫生理鹽水沖洗尿道口
2. 精準(zhǔn)接種技術(shù)
將50μL菌懸液（含1%臺(tái)盼藍(lán)染色驗(yàn)證）吸入PE-10導(dǎo)管
45度角插入尿道，遇到阻力后回抽0.5cm（確保進(jìn)入膀胱）
緩慢推注后立即：
垂直提起小鼠尾部保持30秒
輕壓腹部3次促進(jìn)細(xì)菌分布
3. 感染驗(yàn)證時(shí)間點(diǎn)
早期定植：2h后處死檢測(cè)膀胱細(xì)菌量（應(yīng)＞10^4 CFU）
炎癥峰值：24h尿液中白細(xì)胞數(shù)可達(dá)正常值20倍
慢性感染：72h后可見(jiàn)膀胱上皮內(nèi)細(xì)菌群落（IBCs）
二、尿路感染模型構(gòu)建創(chuàng)新改良方案
1. 原位生物發(fā)光成像模型
接種lux標(biāo)記菌株（如UTI89-lux）
使用IVIS系統(tǒng)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)感染進(jìn)展（需提前脫毛）
2. 精確定量移植模型
術(shù)前24h膀胱內(nèi)灌注0.1M鹽酸損傷黏膜
接種后2h膀胱灌注D-甘露糖（競(jìng)爭(zhēng)性抑制細(xì)菌清除）
三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
導(dǎo)管選擇對(duì)比表：
| 導(dǎo)管類(lèi)型 | 適用情況 | 穿孔風(fēng)險(xiǎn) |
|---------|----------|----------|
| 24G留置針 | 常規(guī)模型 | 5-8% |
| PE-10管 | 慢性模型 | ＜3% |
| 34G微針 | 幼鼠實(shí)驗(yàn) | 近乎0 |菌液配制要點(diǎn)：
使用PBS+0.1%明膠作為懸浮劑
接種前37℃預(yù)熱避免膀胱痙攣
術(shù)后護(hù)理創(chuàng)新：
在飲水中添加5%葡萄糖（促進(jìn)細(xì)菌增殖）
使用代謝籠分時(shí)段收集尿液
四、新型評(píng)估技術(shù)
超聲顯微成像：
使用Vevo 3100系統(tǒng)監(jiān)測(cè)膀胱壁增厚（分辨率達(dá)30μm）
微流控芯片檢測(cè)：
取10μL尿液直接檢測(cè)ATP含量（與細(xì)菌量正相關(guān)）
三維病理重建：
膀胱連續(xù)切片免疫熒光染色后數(shù)字化重構(gòu)
五、常見(jiàn)問(wèn)題解決方案
問(wèn)題1：接種后尿液反流
方案：采用"三指壓迫法"（同時(shí)按壓恥骨聯(lián)合和雙側(cè)腹股溝）問(wèn)題2：感染率不穩(wěn)定
方案：在菌液中添加0.01%粘液素（增強(qiáng)定植）問(wèn)題3：繼發(fā)腎感染
方案：接種后立即膀胱灌注2%利多ka因（抑制輸尿管蠕動(dòng)）
